ट्रिस बफर एक आम तौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला पीएच बफर है जिसका व्यापक रूप से जैव रसायन प्रयोगों में उपयोग किया जाता है। पीसीआर प्रतिक्रियाओं में, ट्रिस बफर पीएच स्थिरता बनाए रखने के अलावा डीएनएस गतिविधि को रोकता है। इसकी क्रियाविधि मुख्य रूप से निम्नलिखित पहलुओं में प्रकट होती है:
1. डीएनएस की सक्रिय संरचना बदलें: ट्रिस बफर में मौजूद धनायन डीएनएस की सक्रिय साइट से जुड़ सकता है, जिससे इसकी संरचना बदल जाती है, जिससे इसकी गतिविधि कम हो जाती है। क्रिया का यह तरीका पर्यावरण में मौजूद न्यूक्लिऐस की गतिविधि को रोकता है, जिससे डीएनए टेम्पलेट को क्षरण से बचाया जा सकता है।
2. प्रतिस्पर्धी अवरोध: ट्रिस में मौजूद धनायन डीएनएस के सक्रिय केंद्र के साथ डीएनए टेम्पलेट से प्रतिस्पर्धात्मक रूप से जुड़ सकते हैं, जिससे डीएनएस को टेम्पलेट से बंधने से रोका जा सकता है और इसकी गिरावट गतिविधि को कम किया जा सकता है। यह प्रतिस्पर्धी अवरोध प्रतिक्रिया प्रणाली में अशुद्धियों के कारण डीएनएस गतिविधि को कम कर सकता है।
3. प्रतिक्रिया तापमान बढ़ाएँ: ट्रिस बफर में उच्च तापमान पर अच्छी स्थिरता होती है, इसलिए यह पीसीआर प्रतिक्रिया के तापमान को बढ़ा सकता है। उच्च तापमान DNase की गतिविधि को और बाधित कर सकता है और डीएनए पोलीमरेज़ की प्रवर्धन दक्षता में सुधार कर सकता है। ट्रिस बफर के साथ उच्च तापमान के संयोजन से, DNase के प्रभावों को समाप्त किया जा सकता है और एक शुद्ध पीसीआर उत्पाद प्राप्त किया जा सकता है।
